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     随着高新技术的不断出现，血细胞分析仪在检测技术方面发生了较大变化，其中白细胞分类计数已由电阻抗法的三分类发展为同时使用多项技术联合检测白细胞，再由医疗设备综合分析各项数据，可得出较正确的分类结果。这些技术包括体积分析、激光分析、高频传导分析、光散射分析和细胞化学等，但目前所用的普通血细胞分析仪仍不能对某些细胞进行正确识别，如白血病细胞、单核细胞、异常不典型淋巴细胞等。各类五分类血细胞分析仪的质量保证有赖于参考方法的建立。目前，白细胞分类计数的参考方法仍然是手工分类法，即将血涂片进行瑞氏染色后，在显微镜下对各种白细胞进行分类。

      Hiibl等研究了使用流式细胞术进行白细胞五分类法，这种方法使用了三种荧光染料标记的单克隆抗体对不同白细胞进行染色：FITC标记的抗CD45,PE/CYS标记的抗CD14，PE标记的抗CD2、抗CD16、抗HLA-DR单克隆抗体混合物。根据各种白细胞表面抗原分布的不同对白细胞进行分类。

染色前先用细胞稀释液破坏红细胞，白细胞因表达CD45而与细胞碎片区分开。嗜酸性和嗜碱性粒细胞不能被PE标记的单克隆抗体混合物染色或染色较浅，且CD14阴性，而与其他细胞相区分，被框进LSS(侧向光散射)/CD45直方图内。在LSS/CD45直方图内嗜酸性和嗜碱性粒细胞因表达CD45的强度不同及侧向光散射特征存在差异而被分开。单核细胞表达CD14，同时结合其侧向光散射特征而被框进LSS/CD14区。单核细胞以外的细胞根据侧向和前向光散射（FS）特征差异而在LSS/FS直方图中分为两群，一群包括淋巴细胞和嗜碱性粒细胞，另一群包括中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。从淋巴细胞、嗜碱性粒细胞中减往嗜碱性粒细胞即为淋巴细胞，从总数（100％）中减往嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞相对数，即得中性粒细胞相对数。

根据CD14区分单核细胞时，有少量CD14阴性单核细胞可被漏检，而在区分嗜酸性粒细胞时，排除中性粒细胞是根据中性粒细胞表达CD16，若存在大量CD16弱表达的成熟中性粒细胞，则这部分中性粒细胞会干扰嗜酸性粒细胞计数，使嗜酸性粒细胞结果偏高，这种情况主要见于炎症反应。研究还发现，选择不同的标本处理方法和流式细胞仪，固然所得结果相关性较好，但不同细胞亚群计数结果间的差异具有明显的统计学意义，这体现了方法学选择的重要性。流式细胞仪白细胞五分类法综合运用多种细胞表面标志和光散射特征对白细胞进行识别，具有较高的特异性，其计数结果与手工分类法相关性较好，而且重现性远远优于手工分类法，有看成为白细胞分类计数的参考方法。